Tikoloho ea Setso sa Lisele E Ama Tlhahiso ea Lisele

E 'ngoe ea melemo ea mantlha ea setso sa lisele ke bokhoni ba ho laola k'hemistri ea 'mele ea tlhahiso ea lisele (ke hore mocheso, pH, khatello ea osmotic, tsitsipano ea O2 le CO2) le tikoloho ea fisioloji (ke hore, homone le limatlafatsi).Ntle le mocheso, tikoloho ea setso e laoloa ke mokhoa oa ho hōla.

Leha tikoloho ea fisioloji ea setso e sa hlaka joalo ka tikoloho ea eona ea 'mele le ea lik'hemik'hale, kutloisiso e ntle ea likarolo tsa serum, ho tsebahatsa lintlha tsa kholo tse hlokahalang bakeng sa ho ata, le kutloisiso e ntle ea tikoloho ea lisele tsa setso.(Ke hore, tšebelisano ea lisele, phallo ea khase, tšebelisano le matrix) joale e lumella mela e meng ea lisele hore e hlahisoe mecheng ea litaba e se nang serum.

1. Tikoloho ea setso e ama kholo ea lisele
Ka kopo hlokomela hore maemo a setso sa sele a fapane bakeng sa mofuta o mong le o mong oa sele.
Liphello tsa ho kheloha maemo a setso a hlokehang bakeng sa mofuta o itseng oa sele ho tloha ho polelo ea phenotypes e sa tloaelehang ho ea ho ho hlōleha ho feletseng ha setso sa lisele.Ka hona, re khothaletsa hore o tloaelane le mohala oa sele oo o o ratang 'me u latele ka tieo litaelo tse fanoeng bakeng sa sehlahisoa ka seng seo u se sebelisang tekong ea hau.

2.Litaelo tsa ho theha tikoloho e ntlafalitsoeng ea setso sa lisele bakeng sa lisele tsa hau:
Mecha ea litaba ea setso le serum (bona ka tlase bakeng sa tlhaiso-leseling e batsi)
pH le maemo a CO2 (sheba ka tlase bakeng sa tlhaiso-leseling e batsi)
Hlaolela polasetiki (bona ka tlase bakeng sa tlhaiso-leseling e batsi)
Mocheso (sheba ka tlase bakeng sa lintlha tse ling)

2.1 Mecha ea litaba ea Setso le Serum
Setsi sa setso ke karolo ea bohlokoa ka ho fetisisa tikolohong ea setso, hobane e fana ka limatlafatsi, lintlha tsa kholo le lihomone tse hlokahalang bakeng sa kholo ea lisele, le ho laola pH le khatello ea osmotic ea setso.

Leha liteko tsa pele tsa setso sa lisele li ile tsa etsoa ho sebelisoa mecha ea litaba ea tlhaho e fumanoeng ho tsoa litsing tsa 'mele le maro a 'mele, tlhoko ea maemo, boleng ba media, le tlhoko e ntseng e eketseha e lebisitse ho nts'etsopele ea mecha ea litaba e hlakileng.Mefuta e meraro ea mantlha ea mecha ea litaba ke basal media, media media e fokotsehileng le media e se nang serum, mme ba na le litlhoko tse fapaneng tsa tlatsetso ea serum.

2.1.1 Mokhoa oa motheo
Gibco cell culture medium
Bongata ba lisele tsa lisele li hola hantle mecheng ea litaba ea mantlha e nang le li-amino acid, livithamini, matsoai a inorganic, le mehloli ea khabone (joalo ka glucose), empa metsoako ena ea mantlha ea media e tlameha ho tlatselletsoa ka serum.

2.1.2 Serum medium e fokotsehile
Botlolo e nang le Gibco Low Serum Medium
Leano le leng la ho fokotsa litlamorao tse mpe tsa serum litekong tsa setso sa lisele ke ho sebelisa mecha ea litaba e fokotsang serum.Serum ea serum e fokotsehileng ke mokhoa oa motheo oa mahareng o ruileng ka limatlafatsi le lintlha tse tsoang liphoofolong, tse ka fokotsang serum e hlokahalang.

2.1.3 Serum e se nang serum
Botlolo e nang le Gibco serum-free medium
Serum-free medium (SFM) e thibela tšebeliso ea serum ea liphoofolo ka ho nkela serum sebaka ka phepo e nepahetseng le metsoako ea lihomone.Litloaelo tse ngata tsa mantlha le mela ea lisele li na le libopeho tsa serum tse se nang serum, ho kenyeletsoa mohala oa tlhahiso ea protheine ea China Hamster Ovary (CHO), mela e fapaneng ea lisele tsa hybridoma, mela ea likokoanyana Sf9 le Sf21 (Spodoptera frugiperda), hammoho le Moamoheli oa tlhahiso ea vaerase. (mohlala, 293, VERO, MDCK, MDBK), joalo-joalo E 'ngoe ea melemo e ka sehloohong ea ho sebelisa serum-free medium ke bokhoni ba ho etsa khetho e mahareng bakeng sa mefuta e itseng ea lisele ka ho khetha motsoako o nepahetseng oa lintlha tsa kholo.Tafole e latelang e thathamisa melemo le bofokoli ba mecha ea phatlalatso e se nang serum.

Molemo
Eketsa ho hlaka
Tshebetso e tsitsitseng haholoanyane
Ho hloekisa habonolo le ho sebetsa ka tlaase ho metsi
Lekola tšebetso ea lisele ka nepo
Eketsa tlhahiso
Taolo e betere ea maikutlo a 'mele
E ntlafalitse ho lemoha mecha ea litaba ea lisele
Bothata
Litlhokahalo tsa foromo e mahareng ea mofuta oa sele
E hloka bohloeki bo phahameng ba reagent
Ho fokotsa ho hola

2.2.1 pH boemo
Boholo ba mela e tloaelehileng ea lisele tsa mammalian e hola hantle ho pH 7.4, 'me liphapang lipakeng tsa mela e fapaneng ea lisele li nyane.Leha ho le joalo, mela e meng e fetotsoeng ea lisele e bontšitsoe hore e hola hamolemo sebakeng se nang le asiti hanyenyane (pH 7.0 - 7.4), ha mela e meng e tloaelehileng ea lisele tsa fibroblast e khetha tikoloho ea alkaline hanyenyane (pH 7.4 - 7.7).Methapo ea lisele tsa likokoanyana joalo ka Sf9 le Sf21 e hola hantle ho pH 6.2.

2.2.2 CO2 boemo
Setsi sa kholo se laola pH ea setso mme se thibela lisele tsa setso ho hanela liphetoho pH.Hangata, buffering ena e finyelloa ka ho ba le organic (mohlala, HEPES) kapa CO2-bicarbonate-based buffers.Hobane pH ea mahareng e ipapisitse le ho leka-lekana ha carbon dioxide e qhibilihisitsoeng (CO2) le bicarbonate (HCO3-), liphetoho tsa CO2 ea sepakapaka li tla fetola pH ea mahareng.Ka hona, ha u sebelisa buffer e mahareng e nang le buffer e thehiloeng ho CO2-bicarbonate, ho hlokahala hore u sebelise CO2 e sa tloaelehang, haholo-holo ha u lema lisele ka har'a lijana tsa setso tse bulehileng kapa ho hlahisa mela e fetotsoeng ea sele ka bongata bo phahameng.Le hoja bafuputsi ba bangata ba atisa ho sebelisa 5-7% CO2 moeeng, liteko tse ngata tsa setso sa lisele hangata li sebelisa 4-10% CO2.Leha ho le joalo, sehare se seng le se seng se na le tsitsipano ea CO2 e khothaletsoang le mahloriso a bicarbonate ho fihlela pH e nepahetseng le khatello ea osmotic;bakeng sa tlhaiso-leseling e batsi, ka kopo sheba litaelo tsa moetsi oa mahareng.

2.3 Ho hlaolela lipolasetiki
Li-plastiki tsa setso sa sele li fumaneha ka mefuta e fapaneng, boholo le bokaholimo ho lumellana le lits'ebetso tse fapaneng tsa setso sa sele.Sebelisa seleng setso polasetiki holim'a tataiso le seleng setso setshelo tataiso mona ka tlase ho u thusa ho khetha polasetiki e nepahetseng bakeng sa kopo ya hao setso setso.
Sheba lipolasetiki kaofela tsa Thermo Scientific Nunc cell culture (sehokelo sa papatso)

2.4 Mocheso
Mocheso o nepahetseng bakeng sa setso sa lisele o itšetlehile haholo ka mocheso oa 'mele oa moeti eo lisele li arohaneng le tsona, le ho isa tekanyong e fokolang ka liphetoho tsa anatomical mocheso (mohlala, mocheso oa letlalo o ka ba o ka tlaase ho feta oa mesifa ea masapo. ).Bakeng sa setso sa lisele, Ho chesa haholo ke bothata bo tebileng ho feta ho chesa haholo.Ka hona, mocheso ka har'a incubator hangata o behiloe hanyane ka tlase ho mocheso o nepahetseng.

2.4.1 Mocheso o nepahetseng bakeng sa mela e fapaneng ea lisele
Bongata ba mela ya disele tsa batho le diamusi di bolokwa ho 36°C ho isa ho 37°C bakeng sa kgolo e ntle.
Lisele tsa likokoanyana li lengoa ho 27 ° C bakeng sa kholo e nepahetseng;di hola butle haholo mochesong o tlase le mocheso o pakeng tsa 27°C le 30°C.Ka holimo ho 30 ° C, matla a lisele tsa likokoanyana a fokotseha, esita le haeba a khutlela ho 27 ° C, lisele li ke ke tsa hlaphoheloa.
Lisele tsa Avian cell li hloka 38.5°C ho fihlela kholo e kholo.Le hoja lisele tsena li ka bolokoa ho 37°C, li tla hōla butle.
Lisele tsa lisele tse tsoang ho liphoofolo tse nang le mali a batang (joaloka liphoofolo tse phelang metsing a leoatle, litlhapi tsa metsing a batang) li ka mamella mocheso o pharaletseng oa 15°C ho isa ho 26°C.